琼脂糖凝胶电泳 配方与步骤

1

×。

步骤：

1.

制备

1%

琼脂糖凝胶

(

大胶用

70ml,

小胶用

50ml

，我们用

30ml):

称

0.3

g

琼脂糖置于

100ml

锥形瓶中，加入

30

ml

1

×

TAE

，瓶口倒扣小烧杯。

微波炉加热煮沸

3

次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成

1.0%

琼脂糖凝胶液。

2.

胶板制备

:

取电泳槽内的有机玻璃内槽

(

制胶槽

)

洗干净

,

晾干

,

放入制胶玻璃板

.

取透明胶带

将玻璃板与内槽两端边缘封好

,

形成模子

.

将内槽置于水平位置

,

并放好梳子

.

将冷却到

65

℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上

,

使胶液缓慢

展开

,

直到整个玻璃板表面形成均匀胶层

.

室温下静置直至凝胶完全凝固

,

垂直轻拔梳

子

,

取下胶带

,

将凝胶及内槽放入电泳槽中

.

添加

1

×

TAE

电泳缓冲液至没过胶板为止

.

3.

加样

:

样品制备：

（

10ul

体系

/

样品槽）于

0.25ml

离心管中

样品

RNA

（最后加）

:

2ul

/3ul

/5ul

6

×

DNA

loading

buffer:

10

/

6=1.7ul

100

×

Sybergreen

：

0.1ul

DEPC

水：

至

10ul

(

注意

:

加样前要先记下加样的顺序

).

分别将样品加入胶板的样品小槽内

,

每加完

一个样品

,

应更换一个枪头

,

以防污染

,

加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面

.

4.

电泳

:

加样后的凝胶板立即通电进行电泳

,

电压

60-

100V

,

样品由负极

(

黑色

)

向正极

(

红色

)

方向移动

.

电压升高

,

琼脂糖凝胶的有效分离范围降低

.

当溴酚蓝移动到距离胶板下沿

约

1cm

处时

,

停止电泳

.

5.

电泳完毕后

,

取出凝胶

,

利用科

212

凝胶成像系统

,

在紫外灯（

trans

UV

）下观察拍照

保存

.DNA

存在则显示出红色荧光条带

.

RNA

完美提出应该是三条带：

28

，

18,

5.8

。

28

和

18

比较亮

,

而且

28

是

18

亮度的

2

倍

,5.8

基本很模糊，可有可无